实验原理:
肿瘤血管生成是一个极其复杂的过程,一般包括包括血管内皮基质降解、内皮细胞移行、内皮细胞增殖、内皮细胞管道化分支形成血管环和形成新的基底膜等步骤。由于肿瘤组织这种新生血管结构及功能异常,且血管基质不完善,这种微血管容易发生渗漏,因此肿瘤细胞不需经过复杂的侵袭过程而直接穿透到血管内进入血流并在远隔部位形成转移。
血管生成(Angiogenesis)是指源于已存在的毛细血管和毛细血管后微静脉新的毛细血管性血管的生长。无论原发性肿瘤还是继发性肿瘤,一旦生长直径超过1~2 mm,都会有血管生成。这是由于肿瘤细胞自身可分泌多种生长因子,诱导血管生成。
实验方法
1. 将原浓度的matrigel胶(10 mg/mL)置于4℃冰箱中过夜,使其成为胶冻状。
2. 将胶冻状的matrigel胶铺入24孔板的孔中,每孔40 μL,使其成为一小丘的形状,然后置于37℃孵箱中2 h使其固化。
3. 将细胞消化计数,将某一密度的细胞悬液滴加至matrigel胶的表面置于37℃孵箱继续培养,每孔1 mL,每组三个复孔。
4. 于100-400倍相差显微镜下,12,24, 48, 72, 96 h后,后取出细胞培养板,拍照,并计数每孔的管腔形成个数,数据用均数+标准差表示。