一、实验用液的配置

(1)、地塞米松储备液配制

取3.29mg地塞米松粉末于1.5ml PE管中，加无水乙醇1ml，涡旋至完全溶解，0.22μm微孔滤膜过滤除菌。储备液最终浓度为10mM/mL，于-20℃避光保存。

(2)、胰岛素储备液的配置

取10mg胰岛素粉末于2ml EP管中，加双蒸水500μl，涡旋，再加0.02Mm HCL(100-200μl),涡旋，最后加双蒸水至1ml，0.22μl微孔滤膜过滤除菌。储备液最终浓度为5mg/ml，4℃避光短期保存（1周），-20℃避光长期保存（1个月）。

(3)、IBMX储备液配制取

11.5mg胰岛素粉末于2ml EP管中，加双蒸水500μl，涡旋，再加1N NaOH(100-200μl)，涡旋，最后加双蒸水至1ml，0.22μl微孔滤膜过滤除菌。储备液最终浓度为51.8mM/ml，最好现用现配。

(4)、诱导分化液

A诱导液一

加以下试剂至10ml 含10%FBS的DMEM培养液中，混匀，现用现配。

B诱导剂二

加20μl胰岛素贮备液（5mg/ml）于10ml含10%FBS的DEME培养液中，配制成含胰岛素1 0μg/ml的溶液。  

二、实验流程

2.1 诱导分化

1) d1-d2天：待细胞长至100%时加诱导剂一，培养52-58h

2) d3-d4天：换成诱导液二，培养2天

3) d5-d6天：更换诱导液二，培养2天  

4) d7天：换成含10%FBS的培养液

5) d8天：细胞固定染色  

2.2.固定和染色:  

1) 细胞固定：取出培养皿，弃培养液，加PBS 3ml润洗两遍,再加10%甲醛固定30min，弃固定液，晾干。

2) 细胞染色

A油红配置：将0.6g油红溶于200ml异丙醇中，过滤，配制成油红贮备液，染色前取一定量油红贮备液加双蒸水以3：2的比例混匀，过滤，静置10min；

B油红染色：取配制好的油红上清液2ml于培养皿中，染色30min。弃油红染液，双蒸水洗三遍，至倒置显微镜下观察分化结果。

三、客户提供

样本描述，相关实验设计内容如作用时间和样本浓度等。

四、结果提供

实验详细实验方法、结果及细胞

五、服务周期

10-15工作日